Rekonstituce a laboratorní měření
Výpočty a laboratorní technika v jednoduchých krocích. Jde pouze o laboratorní postup. Nic na této stránce není návodem k použití u lidí ani zvířat.
- Co je rekonstituce?
- Co obsahuje bakteriostatická voda?
- Jak se peptid v laboratoři rekonstituuje?
- Sterilní voda, nebo bakteriostatická voda: jak se liší?
- Kdy je bakteriostatická voda správnou volbou?
- Proč rozdělit roztok na alikvoty?
- Jak vypočítat objem k natažení?
- Je dobrý nápad zmrazit rozpuštěný peptid?
- Jak dlouho zůstává peptid po rozpuštění použitelný?
- Jak by se měla lahvička skladovat před rekonstitucí?
- Co znamená zakalený roztok?
- Jak vypadá čisté zacházení?
Co je rekonstituce?
Rekonstituce znamená převedení lyofilizovaného prášku zpět na kapalinu přidáním rozpouštědla. U peptidů je tímto rozpouštědlem obvykle bakteriostatická voda nebo sterilní voda. Rozhodují tři volby: jaké rozpouštědlo, kolik a jak ho přidáte. Zvolený objem určuje koncentraci pro všechny další kroky.
Co obsahuje bakteriostatická voda?
Je to sterilní voda s přídavkem přibližně 0.9% benzylalkoholu. Benzylalkohol je konzervant, který brzdí růst bakterií. Díky němu lze do lahvičky vstoupit vícekrát, aniž by se v ní hromadily bakterie. Proto je standardním rozpouštědlem pro laboratorní práci, která vyžaduje několik odběrů z jedné lahvičky.
Jak se peptid v laboratoři rekonstituuje?
Nejprve nechte lahvičku dosáhnout pokojové teploty. Plánovaný objem rozpouštědla přidávejte pomalu a nechte ho stékat po vnitřní stěně lahvičky, místo abyste ho stříkali na prášek. Jemně kružte, dokud se vše nerozpustí. Netřepejte, protože třepání podporuje shlukování a pěnění. Zapište si přidaný objem, protože určuje vaši koncentraci.
Sterilní voda, nebo bakteriostatická voda: jak se liší?
Sterilní voda je v uzavřeném stavu bez mikroorganismů. Jakmile se lahvička otevře, růstu nic nebrání. Bakteriostatická voda obsahuje přibližně 0.9% benzylalkoholu, který udržuje růst pod kontrolou i při dalších vstupech. Pro jednorázové použití zvolte sterilní vodu. Pro lahvičku, kterou budete otevírat opakovaně, zvolte bakteriostatickou.
Kdy je bakteriostatická voda správnou volbou?
Použijte ji k rekonstituci lyofilizovaného materiálu, ze kterého budete odebírat několikrát. Benzylalkohol omezuje růst bakterií mezi odběry. Pokud se přípravek použije jen jednou, postačí obyčejná sterilní voda. Konzervant má smysl jen tehdy, když se do lahvičky bude vstupovat opakovaně.
Proč rozdělit roztok na alikvoty?
Alikvot je odměřená část odebraná z většího vzorku. Pokud rekonstituovaný materiál rozdělíte do jednorázových alikvotů, každá část se zmrazí a rozmrazí jen jednou. Tím celou šarži ušetříte poškození, které se hromadí s opakovanými cykly zmrazení a rozmrazení.
Jak vypočítat objem k natažení?
Koncentrace je hmotnost dělená objemem. Lahvička s 10 mg rozpuštěná ve 2 mL tedy obsahuje 5 mg v každém mL. Objem pro dané množství zjistíte tak, že toto množství vydělíte koncentrací. Všechny hodnoty udržujte od začátku do konce ve stejné jednotce. Záměna miligramů a mikrogramů posune výsledek o faktor 1000.
Je dobrý nápad zmrazit rozpuštěný peptid?
Zmrazování se někdy používá, ale jak dobře jej daný peptid snáší, často není známo, a každý cyklus zmrazení a rozmrazení přidává poškození, a to koncentrováním rozpuštěných látek i fyzickým namáháním. Pokud zmrazujete, rozdělte roztok předem do jednorázových alikvotů, aby se každý rozmrazil jen jednou. Nejškodlivějším zvykem je opakované zmrazování a rozmrazování jedné lahvičky.
Jak dlouho zůstává peptid po rozpuštění použitelný?
Mnohem kratší dobu než suchý prášek. Přesná doba závisí na peptidu, jeho koncentraci, rozpouštědle a teplotě. Běžně používaným konzervativním pravidlem pro otevřenou vícedávkovou lahvičku je 28 dní v lednici. Nikdy nepočítejte s měsíci. Jakmile je přítomna voda, rozkladné reakce se znovu spustí. Právě proto se materiál přepravuje v suchém stavu.
Jak by se měla lahvička skladovat před rekonstitucí?
Nechte lahvičku uzavřenou a uchovávejte ji v chladu, temnu a suchu, dokud ji nebudete potřebovat. Neotevřený lyofilizovaný materiál je nejstabilnější přesně ve stavu, v jakém dorazil. Než porušíte uzávěr, nechte ho ohřát na pokojovou teplotu. Zabráníte tak kondenzaci vzdušné vlhkosti na prášku.
Co znamená zakalený roztok?
Zákal po rekonstituci obvykle ukazuje na materiál, který se nerozpustil nebo se shlukl. Není to jen známka zředění. Častými příčinami jsou příliš prudké přidání rozpouštědla, třepání místo kroužení nebo práce s lahvičkou, která je ještě studená. Pokud jemné kroužení zákal neodstraní, nepředpokládejte, že roztok má uvedenou koncentraci.
Jak vypadá čisté zacházení?
Pracujte na čistém povrchu. Před každým vstupem otřete pryžovou zátku lahvičky tamponem. Pokaždé použijte novou jehlu. Nedotýkejte se ničeho, co přijde do styku s obsahem. Kontaminace se obvykle dostává dovnitř opakovanými vstupy s opakovaně použitými jehlami, nikoli z materiálu.