Ištirpinimas ir laboratoriniai matavimai
Skaičiavimai ir darbo technika paprastais žingsniais. Tai tik laboratorinė procedūra. Niekas šiame puslapyje nėra nurodymai dėl naudojimo žmonėms ar gyvūnams.
- Kas yra ištirpinimas?
- Kas yra bakteriostatiniame vandenyje?
- Kaip peptidas ištirpinamas laboratorijoje?
- Sterilus ar bakteriostatinis vanduo: kuo jie skiriasi?
- Kada bakteriostatinis vanduo yra tinkamas pasirinkimas?
- Kodėl tirpalą dalyti į alikvotas?
- Kaip apskaičiuoti įtraukiamą tūrį?
- Ar verta užšaldyti ištirpintą peptidą?
- Kiek laiko ištirpintas peptidas išlieka tinkamas?
- Kaip laikyti buteliuką prieš ištirpinimą?
- Ką reiškia drumstas tirpalas?
- Kaip atrodo švarus darbas?
Kas yra ištirpinimas?
Ištirpinimas reiškia liofilizuotų miltelių pavertimą skysčiu pridedant tirpiklio. Peptidų atveju tirpiklis paprastai yra bakteriostatinis arba sterilus vanduo. Svarbūs trys pasirinkimai: koks tirpiklis, kiek jo ir kaip jį pridėti. Pasirinktas tūris nulemia koncentraciją visiems tolesniems žingsniams.
Skaityti daugiau: tyrimų peptidų ištirpinimas žingsnis po žingsnio →
Kas yra bakteriostatiniame vandenyje?
Tai sterilus vanduo su maždaug 0.9% benzilo alkoholio. Benzilo alkoholis yra konservantas, stabdantis bakterijų augimą. Dėl jo į buteliuką galima įdurti daugiau nei kartą, bakterijoms viduje nesidauginant. Todėl jis yra standartinis tirpiklis laboratoriniam darbui, kai iš vieno buteliuko reikia įtraukti kelis kartus.
Skaityti daugiau: bakteriostatinis vanduo, palyginti su steriliu vandeniu →
Kaip peptidas ištirpinamas laboratorijoje?
Pirmiausia leiskite buteliukui sušilti iki kambario temperatūros. Numatytą tirpiklio tūrį pilkite lėtai, leisdami jam tekėti vidine buteliuko sienele, o ne purkšdami tiesiai ant miltelių. Švelniai pasukiokite, kol viskas ištirps. Nekratykite, nes kratymas skatina sulipimą ir putojimą. Užsirašykite pridėtą tūrį, nes jis nustato Jūsų koncentraciją.
Skaityti daugiau: tyrimų peptidų ištirpinimas žingsnis po žingsnio →
Sterilus ar bakteriostatinis vanduo: kuo jie skiriasi?
Sterilus vanduo užsandarintas yra be mikroorganizmų. Atidarius buteliuką, niekas nestabdo jų augimo. Bakteriostatiniame vandenyje yra maždaug 0.9% benzilo alkoholio, kuris riboja augimą ir vėlesnių įdūrimų metu. Vienkartiniam naudojimui rinkitės sterilų. Buteliukui, kurį atidarysite vėl ir vėl, rinkitės bakteriostatinį.
Skaityti daugiau: bakteriostatinis vanduo, palyginti su steriliu vandeniu →
Kada bakteriostatinis vanduo yra tinkamas pasirinkimas?
Naudokite jį liofilizuotai medžiagai ištirpinti, kai iš jos įtrauksite kelis kartus. Benzilo alkoholis riboja bakterijų augimą tarp įtraukimų. Jei tirpalas naudojamas tik vieną kartą, užtenka paprasto sterilaus vandens. Konservantas vertingas tik tada, kai į buteliuką bus duriama pakartotinai.
Skaityti daugiau: bakteriostatinis vanduo, palyginti su steriliu vandeniu →
Kodėl tirpalą dalyti į alikvotas?
Alikvota – išmatuota dalis, paimta iš didesnio mėginio. Jei ištirpintą medžiagą padalijate į vienkartines alikvotas, kiekviena dalis užšaldoma ir atitirpinama tik kartą. Taip visa partija apsaugoma nuo žalos, kuri kaupiasi per pakartotinius užšaldymo ir atitirpinimo ciklus.
Kaip apskaičiuoti įtraukiamą tūrį?
Koncentracija – tai masė, padalyta iš tūrio. Taigi 10 mg buteliukas, ištirpintas 2 mL, kiekviename mL turi 5 mg. Norėdami rasti tūrį, atitinkantį tam tikrą kiekį, padalykite tą kiekį iš koncentracijos. Visus skaičius nuo pradžios iki galo išreikškite tais pačiais vienetais. Supainioję miligramus ir mikrogramus, rezultatą suklysite 1000 kartų.
Skaityti daugiau: tyrimų peptidų ištirpinimas žingsnis po žingsnio →
Ar verta užšaldyti ištirpintą peptidą?
Užšaldymas kartais taikomas, tačiau dažnai nežinoma, kaip konkretus peptidas jį toleruoja, o kiekvienas užšaldymo ir atitirpinimo ciklas prideda žalos dėl koncentruotų ištirpusių medžiagų ir fizinės įtampos. Jei užšaldote, iš anksto padalykite tirpalą į vienkartines alikvotas, kad kiekviena būtų atitirpinta tik kartą. Žalingiausias įprotis – vis iš naujo užšaldyti ir atitirpinti tą patį buteliuką.
Skaityti daugiau: kiek laiko ištirpintas peptidas išlieka tinkamas →
Kiek laiko ištirpintas peptidas išlieka tinkamas?
Daug trumpiau nei sausi milteliai. Tikslus laikotarpis priklauso nuo peptido, jo koncentracijos, tirpiklio ir temperatūros. Dažnai taikoma atsargi taisyklė atidarytam daugkartinio naudojimo buteliukui – 28 dienos šaldytuve. Niekada neplanuokite mėnesiams. Kai tik atsiranda vandens, skilimo reakcijos vėl prasideda. Būtent dėl to medžiaga siunčiama sausa.
Skaityti daugiau: kiek laiko ištirpintas peptidas išlieka tinkamas →
Kaip laikyti buteliuką prieš ištirpinimą?
Laikykite buteliuką užsandarintą šaltoje, tamsioje ir sausoje vietoje, kol jo prireiks. Neatidaryta liofilizuota medžiaga stabiliausia lygiai tokios būklės, kokios atkeliavo. Prieš pažeisdami sandarinimą, leiskite jai sušilti iki kambario temperatūros. Taip ore esanti drėgmė nesikondensuos ant miltelių.
Ką reiškia drumstas tirpalas?
Drumstumas po ištirpinimo paprastai rodo neištirpusią arba sulipusią medžiagą. Tai nėra tiesiog praskiedimo požymis. Dažnos priežastys – per stipriai pilamas tirpiklis, kratymas vietoj pasukiojimo arba darbas su dar šaltu buteliuku. Jei švelnus pasukiojimas drumstumo nepašalina, nelaikykite, kad tirpalo koncentracija atitinka nurodytąją.
Kaip atrodo švarus darbas?
Dirbkite ant švaraus paviršiaus. Prieš kiekvieną įdūrimą nuvalykite guminį buteliuko kamštelį tamponu. Kiekvieną kartą naudokite naują adatą. Nelieskite nieko, kas susilies su turiniu. Užteršimas paprastai patenka per pakartotinius įdūrimus pakartotinai naudojamomis adatomis, o ne iš pačios medžiagos.