Rekonstitucija in laboratorijsko merjenje
Računanje in laboratorijska tehnika v preprostih korakih. To je izključno laboratorijski postopek. Nič na tej strani ni navodilo za uporabo pri ljudeh ali živalih.
- Kaj je rekonstitucija?
- Kaj vsebuje bakteriostatična voda?
- Kako se peptid rekonstituira v laboratoriju?
- Sterilna ali bakteriostatična voda: v čem se razlikujeta?
- Kdaj je bakteriostatična voda prava izbira?
- Zakaj raztopino razdeliti na alikvote?
- Kako izračunate volumen za odvzem?
- Ali je zamrzovanje raztopljenega peptida dobra zamisel?
- Kako dolgo ostane peptid po raztapljanju uporaben?
- Kako shranjevati vialo pred rekonstitucijo?
- Kaj pomeni motna raztopina?
- Kako je videti čisto ravnanje?
Kaj je rekonstitucija?
Rekonstitucija pomeni, da liofiliziran prašek z dodatkom topila spet spremenite v tekočino. Pri peptidih je to topilo običajno bakteriostatična voda ali sterilna voda. Pomembne so tri odločitve: katero topilo, koliko in kako ga dodate. Izbrani volumen določi koncentracijo za vse nadaljnje korake.
Več: rekonstitucija raziskovalnih peptidov korak za korakom →
Kaj vsebuje bakteriostatična voda?
To je sterilna voda z dodanim približno 0.9% benzilnega alkohola. Benzilni alkohol je konzervans, ki zavira rast bakterij. Zaradi njega je v vialo mogoče vstopiti večkrat, ne da bi se v njej namnožile bakterije. Zato je standardno topilo za laboratorijsko delo, pri katerem je iz ene viale potrebnih več odvzemov.
Kako se peptid rekonstituira v laboratoriju?
Najprej počakajte, da viala doseže sobno temperaturo. Načrtovani volumen topila dodajajte počasi, tako da teče po notranji steni viale, namesto da ga brizgate na prašek. Nežno vrtinčite, dokler se vse ne raztopi. Ne stresajte, ker stresanje spodbuja nastajanje skupkov in pene. Zapišite dodani volumen, saj ta določa vašo koncentracijo.
Več: rekonstitucija raziskovalnih peptidov korak za korakom →
Sterilna ali bakteriostatična voda: v čem se razlikujeta?
Sterilna voda je ob zaprtju brez organizmov. Ko je viala odprta, rasti nič ne preprečuje. Bakteriostatična voda vsebuje približno 0.9% benzilnega alkohola, ki rast zadržuje tudi pri poznejših vstopih. Za enkratno uporabo izberite sterilno. Za vialo, ki jo boste odpirali znova in znova, izberite bakteriostatično.
Kdaj je bakteriostatična voda prava izbira?
Uporabite jo za rekonstitucijo liofiliziranega materiala, iz katerega boste odvzemali večkrat. Benzilni alkohol omejuje rast bakterij med odvzemi. Če se pripravek uporabi samo enkrat, zadostuje navadna sterilna voda. Konzervans je smiseln le, kadar se v vialo vstopa večkrat.
Zakaj raztopino razdeliti na alikvote?
Alikvot je odmerjen del, vzet iz večjega vzorca. Če rekonstituiran material razdelite na alikvote za enkratno uporabo, se vsak del zamrzne in odtali samo enkrat. Tako celotno serijo obvarujete pred poškodbami, ki se kopičijo s ponavljajočimi se cikli zamrzovanja in odtajanja.
Kako izračunate volumen za odvzem?
Koncentracija je masa, deljena z volumnom. Viala z 10 mg, raztopljena v 2 mL, torej vsebuje 5 mg v vsakem mL. Volumen za določeno količino dobite tako, da to količino delite s koncentracijo. Vse podatke od začetka do konca vodite v isti enoti. Zamenjava miligramov in mikrogramov povzroči napako za faktor 1000.
Več: rekonstitucija raziskovalnih peptidov korak za korakom →
Ali je zamrzovanje raztopljenega peptida dobra zamisel?
Zamrzovanje se včasih uporablja, vendar je pogosto neznano, kako dobro ga določen peptid prenaša, vsak cikel zamrzovanja in odtajanja pa doda škodo zaradi koncentriranih raztopljenih snovi in fizične obremenitve. Če zamrzujete, raztopino prej razdelite na alikvote za enkratno uporabo, da se vsak odtali samo enkrat. Najbolj škodljiva navada je večkratno zamrzovanje in odtajanje iste viale.
Kako dolgo ostane peptid po raztapljanju uporaben?
Veliko krajši čas kot suhi prašek. Natančno obdobje je odvisno od peptida, njegove koncentracije, topila in temperature. Pogosto uporabljeno konzervativno pravilo za odprto večodmerno vialo je 28 dni v hladilniku. Nikoli ne načrtujte za mesece. Takoj ko je prisotna voda, se reakcije razgradnje spet začnejo. Prav zato se material pošilja suh.
Kako shranjevati vialo pred rekonstitucijo?
Vialo pustite zaprto in jo hranite na hladnem, temnem in suhem mestu, dokler je ne potrebujete. Neodprt liofiliziran material je najstabilnejši natanko v stanju, v katerem je prispel. Preden odprete zatesnitev, počakajte, da se segreje na sobno temperaturo. Tako preprečite, da bi vlaga iz zraka kondenzirala na prašku.
Kaj pomeni motna raztopina?
Motnost po rekonstituciji običajno kaže na material, ki se ni raztopil ali se je sprijel v skupke. Ni zgolj znak razredčitve. Pogosti vzroki so presilno dodajanje topila, stresanje namesto vrtinčenja ali delo z vialo, ki je še hladna. Če nežno vrtinčenje raztopine ne zbistri, ne domnevajte, da ima navedeno koncentracijo.
Kako je videti čisto ravnanje?
Delajte na čisti površini. Gumijasti zamašek viale pred vsakim vstopom obrišite z zložencem. Vsakič uporabite novo iglo. Ne dotikajte se ničesar, kar bo prišlo v stik z vsebino. Kontaminacija običajno vstopi pri ponavljajočih se vstopih s ponovno uporabljenimi iglami, ne iz materiala.