Rekonstitucija i laboratorijsko mjerenje
Izračuni i laboratorijska tehnika, u jednostavnim koracima. Ovo je isključivo laboratorijski postupak. Ništa na ovoj stranici nije uputa za upotrebu kod ljudi ili životinja.
- Što je rekonstitucija?
- Što sadrži bakteriostatska voda?
- Kako se peptid rekonstituira u laboratoriju?
- Sterilna ili bakteriostatska voda: po čemu se razlikuju?
- Kada je bakteriostatska voda pravi izbor?
- Zašto otopinu podijeliti u alikvote?
- Kako izračunati volumen koji treba izvući?
- Je li dobro zamrzavati otopljeni peptid?
- Koliko dugo peptid ostaje upotrebljiv nakon otapanja?
- Kako treba čuvati bočicu prije rekonstitucije?
- Što znači mutna otopina?
- Kako izgleda čisto rukovanje?
Što je rekonstitucija?
Rekonstitucija znači vraćanje liofiliziranog praha u tekuće stanje dodavanjem otapala. Kod peptida je to otapalo obično bakteriostatska voda ili sterilna voda. Važna su tri izbora: koje otapalo, koliko i kako ga dodajete. Volumen koji odaberete određuje koncentraciju za svaki sljedeći korak.
Više: rekonstitucija istraživačkih peptida, korak po korak →
Što sadrži bakteriostatska voda?
To je sterilna voda s dodatkom oko 0.9% benzilnog alkohola. Benzilni alkohol je konzervans koji sprječava rast bakterija. Zahvaljujući njemu u bočicu se može ulaziti više puta, a da se bakterije u njoj ne nakupljaju. Zato je standardno otapalo za laboratorijski rad koji zahtijeva više izvlačenja iz jedne bočice.
Kako se peptid rekonstituira u laboratoriju?
Najprije pustite da bočica postigne sobnu temperaturu. Polako dodajte planirani volumen otapala tako da se slijeva niz unutarnju stijenku bočice, umjesto da ga štrcate na prah. Lagano kružno miješajte dok se sve ne otopi. Ne tresite je, jer trešnja potiče stvaranje nakupina i pjene. Zapišite dodani volumen jer on određuje Vašu koncentraciju.
Više: rekonstitucija istraživačkih peptida, korak po korak →
Sterilna ili bakteriostatska voda: po čemu se razlikuju?
Sterilna voda je bez organizama dok je zatvorena. Nakon otvaranja bočice ništa ne sprječava rast. Bakteriostatska voda sadrži oko 0.9% benzilnog alkohola, koji drži rast pod kontrolom pri kasnijim ulascima. Odaberite sterilnu za jednokratnu upotrebu. Odaberite bakteriostatsku za bočicu koju ćete otvarati iznova.
Kada je bakteriostatska voda pravi izbor?
Koristite je za rekonstituciju liofiliziranog materijala iz kojeg ćete izvlačiti više puta. Benzilni alkohol ograničava rast bakterija između izvlačenja. Ako se pripravak koristi samo jednom, obična sterilna voda je dovoljna. Konzervans ima smisla samo kada će se u bočicu ulaziti više puta.
Zašto otopinu podijeliti u alikvote?
Alikvot je odmjereni dio uzet iz većeg uzorka. Ako rekonstituirani materijal podijelite u alikvote za jednokratnu upotrebu, svaki se dio zamrzava i odmrzava samo jednom. Tako cijela serija izbjegava oštećenja koja se nakupljaju ponovljenim ciklusima zamrzavanja i odmrzavanja.
Kako izračunati volumen koji treba izvući?
Koncentracija je masa podijeljena volumenom. Dakle, bočica od 10 mg otopljena u 2 mL sadrži 5 mg u svakom mL. Da biste dobili volumen za određenu količinu, podijelite tu količinu koncentracijom. Sve vrijednosti od početka do kraja držite u istoj jedinici. Zamjena miligrama i mikrograma pomiče rezultat za faktor 1000.
Više: rekonstitucija istraživačkih peptida, korak po korak →
Je li dobro zamrzavati otopljeni peptid?
Zamrzavanje se ponekad koristi, ali često nije poznato koliko ga određeni peptid podnosi, a svaki ciklus zamrzavanja i odmrzavanja dodaje oštećenja, zbog koncentriranih otopljenih tvari i fizičkog naprezanja. Ako ipak zamrzavate, otopinu prethodno podijelite u alikvote za jednokratnu upotrebu, kako bi se svaki odmrznuo samo jednom. Najštetnija navika je opetovano zamrzavanje i odmrzavanje jedne bočice.
Koliko dugo peptid ostaje upotrebljiv nakon otapanja?
Znatno kraće od suhog praha. Točno razdoblje ovisi o peptidu, njegovoj koncentraciji, otapalu i temperaturi. Često korišteno konzervativno pravilo za otvorenu višedoznu bočicu je 28 dana u hladnjaku. Nikada ne računajte na mjesece. Čim je prisutna voda, reakcije razgradnje ponovno počinju. Upravo se zato materijal šalje suh.
Kako treba čuvati bočicu prije rekonstitucije?
Ostavite bočicu zatvorenu i držite je na hladnom, tamnom i suhom mjestu dok Vam ne zatreba. Neotvoreni liofilizirani materijal najstabilniji je u točno onom stanju u kojem je stigao. Pustite da se zagrije na sobnu temperaturu prije nego što otvorite zatvarač. Tako sprječavate kondenzaciju vlage iz zraka na prahu.
Što znači mutna otopina?
Zamućenje nakon rekonstitucije obično upućuje na materijal koji se nije otopio ili se zgrudao. To nije samo znak razrjeđenja. Česti uzroci su prenaglo dodavanje otapala, trešnja umjesto kružnog miješanja ili rad s bočicom koja je još hladna. Ako ga lagano kružno miješanje ne ukloni, nemojte pretpostavljati da otopina ima navedenu koncentraciju.
Kako izgleda čisto rukovanje?
Radite na čistoj površini. Prije svakog ulaska obrišite gumeni čep bočice tupferom. Svaki put koristite novu iglu. Ne dodirujte ništa što će doći u dodir sa sadržajem. Kontaminacija obično ulazi kroz opetovane ulaske ponovno korištenim iglama, a ne iz materijala.