Liuottaminen ja laboratoriomittaukset
Laskut ja työtekniikka selkeinä vaiheina. Tämä on vain laboratoriomenettelyä. Mikään tällä sivulla ei ole ohjeistusta käyttöön ihmisillä tai eläimillä.
- Mitä liuottaminen on?
- Mitä bakteriostaattinen vesi sisältää?
- Miten peptidi liuotetaan laboratoriossa?
- Steriili vesi vai bakteriostaattinen vesi: miten ne eroavat?
- Milloin bakteriostaattinen vesi on oikea valinta?
- Miksi liuos jaetaan alikvootteihin?
- Miten vedettävä tilavuus lasketaan?
- Onko liuotetun peptidin pakastaminen hyvä ajatus?
- Kuinka kauan peptidi pysyy käyttökelpoisena liuotettuna?
- Miten pulloa pitäisi säilyttää ennen liuottamista?
- Mitä samea liuos tarkoittaa?
- Miltä puhdas käsittely näyttää?
Mitä liuottaminen on?
Liuottaminen (rekonstituutio) tarkoittaa pakkaskuivatun jauheen palauttamista nesteeksi lisäämällä liuotinta. Peptideillä liuotin on yleensä bakteriostaattinen vesi tai steriili vesi. Kolme valintaa ratkaisee: mikä liuotin, kuinka paljon ja miten se lisätään. Valitsemasi tilavuus määrää pitoisuuden kaikissa seuraavissa vaiheissa.
Mitä bakteriostaattinen vesi sisältää?
Se on steriiliä vettä, johon on lisätty noin 0.9 % bentsyylialkoholia. Bentsyylialkoholi on säilöntäaine, joka hillitsee bakteerien kasvua. Sen ansiosta pulloon voidaan pistää useammin kuin kerran ilman, että bakteereja kertyy sen sisälle. Siksi se on vakioliuotin laboratoriotyössä, jossa samasta pullosta otetaan useita annoksia.
Lue lisää: bakteriostaattinen vesi verrattuna steriiliin veteen →
Miten peptidi liuotetaan laboratoriossa?
Anna pullon ensin lämmetä huoneenlämpöiseksi. Lisää suunniteltu määrä liuotinta hitaasti ja anna sen valua pullon sisäseinää pitkin sen sijaan, että suihkuttaisit sen jauheeseen. Pyöritä varovasti, kunnes kaikki liukenee. Älä ravista, koska ravistaminen edistää paakkuuntumista ja vaahtoamista. Kirjaa lisäämäsi tilavuus, koska se määrää pitoisuuden.
Steriili vesi vai bakteriostaattinen vesi: miten ne eroavat?
Steriili vesi on suljettuna vapaa mikro-organismeista. Kun pullo on avattu, mikään ei estä kasvua. Bakteriostaattinen vesi sisältää noin 0.9 % bentsyylialkoholia, joka pitää kasvun kurissa myöhemmilläkin pistokerroilla. Valitse steriili vesi kertakäyttöön. Valitse bakteriostaattinen vesi pulloon, jonka avaat yhä uudelleen.
Lue lisää: bakteriostaattinen vesi verrattuna steriiliin veteen →
Milloin bakteriostaattinen vesi on oikea valinta?
Käytä sitä pakkaskuivatun materiaalin liuottamiseen, kun otat siitä useita kertoja. Bentsyylialkoholi rajoittaa bakteerien kasvua ottokertojen välillä. Jos valmiste käytetään vain kerran, tavallinen steriili vesi riittää. Säilöntäaineesta on hyötyä vain, kun pulloon pistetään toistuvasti.
Lue lisää: bakteriostaattinen vesi verrattuna steriiliin veteen →
Miksi liuos jaetaan alikvootteihin?
Alikvootti on suuremmasta näytteestä otettu mitattu osa. Jos jaat liuotetun materiaalin kertakäyttöisiin alikvootteihin, kukin osa pakastetaan ja sulatetaan vain kerran. Se säästää koko erän vaurioilta, jotka kertyvät toistuvissa pakastus-sulatussykleissä.
Miten vedettävä tilavuus lasketaan?
Pitoisuus on massa jaettuna tilavuudella. Siksi 10 mg:n pullo, joka on liuotettu 2 mL:aan, sisältää 5 mg jokaisessa mL:ssa. Tietyn määrän vaatiman tilavuuden saat jakamalla määrän pitoisuudella. Pidä kaikki luvut samassa yksikössä alusta loppuun. Milligrammojen ja mikrogrammojen sekoittaminen heittää tuloksen pieleen kertoimella 1000.
Onko liuotetun peptidin pakastaminen hyvä ajatus?
Pakastamista käytetään joskus, mutta usein ei tiedetä, kuinka hyvin tietty peptidi sitä kestää, ja jokainen pakastus-sulatussykli lisää vaurioita tiivistyneiden liuenneiden aineiden ja fyysisen rasituksen kautta. Jos pakastat, jaa liuos etukäteen kertakäyttöisiin alikvootteihin, jotta kukin sulaa vain kerran. Haitallisin tapa on pakastaa ja sulattaa samaa pulloa yhä uudelleen.
Lue lisää: kuinka kauan liuotettu peptidi pysyy käyttökelpoisena →
Kuinka kauan peptidi pysyy käyttökelpoisena liuotettuna?
Paljon lyhyemmän ajan kuin kuiva jauhe. Tarkka aika riippuu peptidistä, sen pitoisuudesta, liuottimesta ja lämpötilasta. Yleisesti käytetty varovainen sääntö avatulle moniannospullolle on 28 päivää jääkaapissa. Älä koskaan suunnittele kuukausien varaan. Heti kun vettä on läsnä, hajoamisreaktiot käynnistyvät uudelleen. Juuri siksi materiaali lähetetään kuivana.
Lue lisää: kuinka kauan liuotettu peptidi pysyy käyttökelpoisena →
Miten pulloa pitäisi säilyttää ennen liuottamista?
Pidä pullo suljettuna kylmässä, pimeässä ja kuivassa paikassa, kunnes tarvitset sitä. Avaamaton pakkaskuivattu materiaali on stabiileimmillaan juuri siinä tilassa, jossa se saapui. Anna sen lämmetä huoneenlämpöiseksi ennen sinetin rikkomista. Se estää ilman kosteutta tiivistymästä jauheeseen.
Mitä samea liuos tarkoittaa?
Sameus liuottamisen jälkeen viittaa yleensä materiaaliin, joka ei ole liuennut tai joka on paakkuuntunut. Se ei ole pelkästään laimennuksen merkki. Yleisiä syitä ovat liuottimen lisääminen liian voimakkaasti, ravistaminen pyörittämisen sijaan tai työskentely vielä kylmän pullon kanssa. Jos varovainen pyörittäminen ei kirkasta liuosta, älä oleta, että liuos on ilmoitetussa pitoisuudessa.
Miltä puhdas käsittely näyttää?
Työskentele puhtaalla alustalla. Pyyhi pullon kumitulppa puhdistuslapulla ennen jokaista pistokertaa. Käytä joka kerta uutta neulaa. Älä koske mihinkään, mikä joutuu kosketuksiin sisällön kanssa. Kontaminaatio pääsee yleensä sisään toistuvien pistojen ja uudelleenkäytettyjen neulojen kautta, ei materiaalista.