Tyrimų peptidų endotoksinų ir sterilumo patikra
Endotoksinai – dažna ir lengvai nepastebima priežastis, kodėl peptidų eksperimentai duoda nepatikimus duomenis, ypač ląstelių kultūrose. HPLC gali parodyti, kad peptidas yra 99% grynumo, nors jame vis dar yra pakankamai endotoksinų, kad iškreiptų rezultatą.
Šiame gide aptariama, kas yra endotoksinai, kodėl jie svarbūs, kaip laboratorijos juos matuoja ir kaip suprasti endotoksinų ir sterilumo eilutes, kurias matysite sertifikate.
Šiame puslapyje
Trumpai apie endotoksinus
Endotoksinai yra lipopolisacharidai (LPS) – didelės molekulės, esančios gramneigiamųjų bakterijų išorinėje membranoje. Jie išsiskiria bakterijoms žūstant ir suyrant. Svarbiausia tai, kad endotoksinai yra atsparūs karščiui ir chemiškai patvarūs. Bakterijas nužudžius ar išfiltravus, endotoksinai lieka.
Todėl mėginys gali būti sterilus, be jokių gyvų organizmų, ir vis tiek turėti endotoksinų. Tai dvi skirtingos problemos, ir kiekvienai reikia atskiro tyrimo.
Kodėl jie svarbūs laboratorijoje
Endotoksinai stipriai aktyvina imuninę sistemą. Atliekant ląstelių kultūrų ir imunologijos darbus, net mažiausi jų kiekiai gali sukelti citokinų išsiskyrimą, įjungti signalinius kelius ir pakeisti eksperimento rodmenis. Todėl užterštas peptidas įneša kintamąjį, nesusijusį su tiriamu junginiu, ir be tyrimo niekas jo nepamatys. Jautriame darbe endotoksinų atmetimas yra viena svarbiausių patikrų, kurias galite atlikti.
Endotoksinų matavimas: LAL tyrimas
Standartinis metodas yra LAL tyrimas (Limulus Amebocyte Lysate). Jo reagentas reaguoja, kai yra endotoksinų. Rezultatai pateikiami endotoksino vienetais miligramui (EU/mg). Kuo mažesnės vertės, tuo geriau. Populiarėja ir be gyvūnų kilmės medžiagų versija, paremta rekombinantiniu C faktoriumi; ji matuoja tą patį.
Sterilumo tyrimas
Sterilumo tyrimas yra atskira patikra. Juo ieškoma gyvybingų bakterijų ir grybelių, o rezultatas paprastai pateikiamas kaip „atitinka“ arba „neatitinka“. Vertinant kartu, sterilumo ir endotoksinų rezultatai mikrobiologinę kokybę apibūdina daug geriau nei kiekvienas atskirai.
Kur rasti rezultatus CoA
Sertifikate ieškokite dviejų eilučių: endotoksinų vertės EU/mg ir sterilumo rezultato „atitinka“ arba „neatitinka“. Mažesnė EU/mg vertė reiškia švaresnę medžiagą. Ataskaita, kurioje yra abu rodikliai, geriau apsaugo Jūsų duomenis nei ta, kurioje nurodytas tik grynumas. Apie likusią dokumento dalį skaitykite mūsų gide, kaip skaityti peptido analizės sertifikatą.
Endotoksinų duomenys NordPeps
Nepriklausomos trečiosios šalies laboratorijos sertifikatai skelbiami kiekvienai partijai mūsų sertifikatų puslapyje, kai tik jie tampa prieinami. Jei sertifikate yra endotoksinų ar sterilumo rezultatai, juos rasite ten kartu su partija, kuriai jie taikomi.
Dažni klausimai
Sterilumo ir endotoksinų tyrimai: kuo jie skiriasi?
Sterilumo tyrimu ieškoma gyvų bakterijų ir grybelių. Endotoksinų tyrimu matuojami bakterijų toksinai (lipopolisacharidai), kurie atsparūs karščiui ir gali išlikti bakterijoms žuvus. Sterilus mėginys vis tiek gali turėti endotoksinų, todėl reikalingi abu tyrimai.
Kas yra EU/mg?
Endotoksino vienetai miligramui. Tai LAL tyrimo rezultatas, kiekybiškai nusakantis užterštumą endotoksinais. Mažesnis skaičius reiškia švaresnę medžiagą.
Jei peptidas yra 99% grynumo, kam rūpintis endotoksinais?
HPLC grynumas vertina peptido frakciją. Jis neaptinka mikrobinių teršalų. 99% grynumo peptide vis tiek gali būti endotoksinų, ir vien jie gali iškreipti ląstelių kultūrų ir imunologijos eksperimentus.