Endotoksīnu un sterilitātes pārbaudes pētniecības peptīdiem
Endotoksīns ir bieži sastopams un viegli nepamanāms iemesls, kāpēc peptīdu eksperimenti dod neuzticamus datus, it īpaši šūnu kultūrās. HPLC var novērtēt peptīda tīrību 99% apmērā, kamēr tas joprojām satur pietiekami daudz endotoksīna, lai izkropļotu rezultātu.
Šajā ceļvedī aplūkots, kas ir endotoksīni, kāpēc tie ir svarīgi, kā laboratorijas tos mēra un kā interpretēt endotoksīnu un sterilitātes rindas, ko redzēsiet sertifikātā.
Šajā lapā
Īsumā par endotoksīniem
Endotoksīni ir lipopolisaharīdi (LPS) – lielas molekulas, kas atrodas gramnegatīvo baktēriju ārējā membrānā. Tie izdalās, baktērijām atmirstot un sadaloties. Galvenais ir tas, ka endotoksīni ir karstumizturīgi un ķīmiski noturīgi. Ja baktērijas iznīcina vai izfiltrē, endotoksīns paliek.
Tāpēc paraugs var būt sterils, bez nekā dzīva, un tomēr saturēt endotoksīnu. Tās ir divas dažādas problēmas, un katrai vajadzīgs savs tests.
Kāpēc tie ir svarīgi laboratorijā
Endotoksīni spēcīgi aktivizē imūnsistēmu. Šūnu kultūru un imunoloģijas darbos pat niecīgi daudzumi var izraisīt citokīnu izdalīšanos, ieslēgt signālceļus un mainīt eksperimentālos rādījumus. Tādējādi piesārņots peptīds ienes mainīgo, kas nav saistīts ar pētāmo savienojumu, un bez testa to neviens nevar ieraudzīt. Jutīgos darbos endotoksīna izslēgšana ir viena no svarīgākajām pārbaudēm, ko varat veikt.
Endotoksīna mērīšana: LAL tests
Standarta metode ir LAL tests (Limulus Amebocyte Lysate). Tā reaģents reaģē, ja ir klāt endotoksīns. Rezultātus norāda endotoksīna vienībās uz miligramu (EU/mg). Jo zemākas vērtības, jo labāk. Arvien plašāk izmanto arī dzīvnieku izcelsmes vielas nesaturošu versiju uz rekombinantā C faktora bāzes; tā mēra to pašu.
Sterilitātes testēšana
Sterilitātes testēšana ir cita pārbaude. Tā meklē dzīvotspējīgas baktērijas un sēnītes, un rezultātu parasti norāda kā atbilst vai neatbilst. Skatot kopā, sterilitātes un endotoksīna rezultāti raksturo mikrobioloģisko kvalitāti daudz labāk nekā katrs atsevišķi.
Kur atrast rezultātus CoA
Sertifikātā meklējiet divas rindas: endotoksīna vērtību EU/mg un sterilitātes rezultātu (atbilst vai neatbilst). Mazāka EU/mg vērtība nozīmē tīrāku materiālu. Pārskats, kurā ir abi, labāk aizsargā Jūsu datus nekā tāds, kurā norādīta tikai tīrība. Par pārējo dokumentu lasiet mūsu ceļvedī par peptīda analīzes sertifikāta (CoA) lasīšanu.
Endotoksīnu dati NordPeps
Neatkarīgas trešās puses laboratorijas sertifikāti tiek publicēti katrai partijai mūsu sertifikātu lapā, tiklīdz tie ir pieejami. Ja sertifikātā ir endotoksīnu vai sterilitātes rezultāti, Jūs tos atradīsiet tur kopā ar partiju, uz kuru tie attiecas.
Biežākie jautājumi
Sterilitātes testēšana un endotoksīnu testēšana: kā tās atšķiras?
Sterilitātes tests meklē dzīvas baktērijas un sēnītes. Endotoksīnu tests mēra baktēriju toksīnus (lipopolisaharīdus), kas iztur karstumu un var saglabāties pēc baktēriju bojāejas. Sterils paraugs joprojām var saturēt endotoksīnu, tāpēc vajadzīgi abi testi.
Kas ir EU/mg?
Endotoksīna vienības uz miligramu. Šo skaitli dod LAL tests, un tas kvantitatīvi raksturo endotoksīna piesārņojumu. Mazāks skaitlis nozīmē tīrāku materiālu.
Ja peptīda tīrība ir 99%, kāpēc uztraukties par endotoksīnu?
HPLC tīrība attiecas uz peptīda frakciju. Tā nekonstatē mikrobu piesārņotājus. Peptīds ar 99% tīrību joprojām var saturēt endotoksīnu, un ar šo endotoksīnu vien pietiek, lai izkropļotu šūnu kultūru un imunoloģijas eksperimentus.