Kutatási peptidek endotoxin- és sterilitásvizsgálata
Az endotoxin gyakori és könnyen figyelmen kívül hagyott oka annak, hogy a peptidkísérletek megbízhatatlan adatokat adnak, különösen sejttenyészetben. A HPLC egy peptidet 99%-os tisztaságúnak minősíthet, miközben az még mindig annyi endotoxint tartalmaz, ami torzíthatja az eredményt.
Ez az útmutató bemutatja, mik az endotoxinok, miért fontosak, hogyan mérik őket a laboratóriumok, és hogyan értelmezze a tanúsítványon látható endotoxin- és sterilitási sorokat.
Ezen az oldalon
Az endotoxinok röviden
Az endotoxinok lipopoliszacharidok (LPS), vagyis a Gram-negatív baktériumok külső membránjában található nagy molekulák. Akkor szabadulnak fel, amikor a baktériumok elpusztulnak és szétesnek. A lényeg, hogy az endotoxinok hőstabilak és kémiailag ellenállók. A baktériumok elpusztítása vagy kiszűrése után az endotoxin visszamarad.
Így lehet egy minta steril, élő szervezet nélküli, és mégis tartalmazhat endotoxint. Ez két különböző probléma, és mindkettőhöz saját vizsgálat kell.
Miért fontosak a laborban
Az endotoxinok erősen aktiválják az immunrendszert. Sejttenyészetes és immunológiai munkában már parányi mennyiségük is citokinfelszabadulást válthat ki, jelátviteli utakat kapcsolhat be, és elmozdíthatja a kísérleti eredményeket. Egy szennyezett peptid tehát a vizsgált vegyülettől független változót visz a kísérletbe, amelyet vizsgálat nélkül senki sem lát. Érzékeny munkában az endotoxin kizárása az egyik legfontosabb ellenőrzés.
Az endotoxin mérése: a LAL-teszt
A standard módszer a LAL-teszt (Limulus amőbocita-lizátum). Reagense endotoxin jelenlétében reakcióba lép. Az eredményeket endotoxinegység per milligrammban (EU/mg) adják meg. Az alacsonyabb érték a jobb. Egyre terjed egy rekombináns C-faktoron alapuló, állati eredetű anyagot nem használó változat is; ez ugyanazt méri.
Sterilitásvizsgálat
A sterilitásvizsgálat egy másik ellenőrzés. Élő baktériumokat és gombákat keres, és eredményét általában megfelelt/nem felelt meg formában adják meg. Együtt olvasva a sterilitási és az endotoxin-eredmény sokkal jobban leírja a mikrobiológiai minőséget, mint bármelyik önmagában.
Az eredmények megtalálása a CoA-n
A tanúsítványon két sort keressen: egy EU/mg-ban megadott endotoxinértéket és egy megfelelt/nem felelt meg sterilitási eredményt. A kisebb EU/mg érték tisztább anyagot jelent. Az a jelentés, amely mindkettőt tartalmazza, jobban védi az adatait, mint amelyik csak a tisztaságot sorolja fel. A dokumentum többi részéhez lásd útmutatónkat a peptid analitikai tanúsítványának olvasásáról.
Endotoxinadatok a NordPepsnél
A független, külső laboratórium tanúsítványait gyártási tételenként tesszük közzé tanúsítványoldalunkon, amint elérhetővé válnak. Ha egy tanúsítvány endotoxin- vagy sterilitási eredményt is tartalmaz, ott találja meg, az érintett gyártási tétel mellett feltüntetve.
Gyakori kérdések
Sterilitásvizsgálat és endotoxinvizsgálat: mi a különbség?
A sterilitásvizsgálat élő baktériumokat és gombákat keres. Az endotoxinvizsgálat bakteriális toxinokat (lipopoliszacharidokat) mér, amelyek túlélik a hőt, és a baktériumok elpusztulása után is megmaradhatnak. Egy steril minta is tartalmazhat endotoxint, ezért mindkét vizsgálatra szükség van.
Mi az EU/mg?
Endotoxinegység per milligramm. Ezt az értéket adja a LAL-teszt, és az endotoxin-szennyezettség mértékét fejezi ki. Az alacsonyabb szám tisztább anyagot jelent.
Ha egy peptid 99%-os tisztaságú, miért kell aggódni az endotoxin miatt?
A HPLC-tisztaság a peptidfrakciót vizsgálja. A mikrobiális szennyeződéseket nem mutatja ki. Egy 99%-os tisztaságú peptid is tartalmazhat endotoxint, és már ez az endotoxin önmagában torzíthatja a sejttenyészetes és immunológiai kísérleteket.