Provjere endotoksina i sterilnosti istraživačkih peptida
Endotoksin je čest i lako previdljiv razlog zbog kojeg peptidni pokusi daju nepouzdane podatke, osobito u staničnim kulturama. HPLC može ocijeniti peptid kao 99% čist, a da on i dalje sadrži dovoljno endotoksina da iskrivi rezultat.
Ovaj vodič objašnjava što su endotoksini, zašto su važni, kako ih laboratoriji mjere i kako tumačiti retke o endotoksinu i sterilnosti koje ćete vidjeti na certifikatu.
Na ovoj stranici
Endotoksini ukratko
Endotoksini su lipopolisaharidi (LPS), velike molekule koje se nalaze u vanjskoj membrani gram-negativnih bakterija. Oslobađaju se kada bakterije ugibaju i raspadaju se. Ključno je da su endotoksini termostabilni i kemijski otporni. Kada se bakterije ubiju ili uklone filtracijom, endotoksin ostaje.
Zato uzorak može biti sterilan, bez ičega živog u sebi, a ipak sadržavati endotoksin. Riječ je o dva različita problema i svaki zahtijeva vlastiti test.
Zašto su važni u laboratoriju
Endotoksini snažno aktiviraju imunosni sustav. U radu sa staničnim kulturama i u imunologiji već sićušne količine mogu potaknuti otpuštanje citokina, uključiti signalne putove i pomaknuti eksperimentalna očitanja. Kontaminirani peptid stoga unosi varijablu nepovezanu sa spojem koji se proučava, a bez testa je nitko ne može vidjeti. U osjetljivom radu isključivanje endotoksina jedna je od najvažnijih provjera koje možete provesti.
Mjerenje endotoksina: LAL test
Standardna metoda je LAL test (Limulus Amebocyte Lysate). Njegov reagens reagira kada je prisutan endotoksin. Rezultati se izražavaju u jedinicama endotoksina po miligramu (EU/mg). Niže vrijednosti su bolje. Sve se više koristi inačica bez životinjskog podrijetla temeljena na rekombinantnom faktoru C; ona mjeri isto.
Testiranje sterilnosti
Testiranje sterilnosti zasebna je provjera. Traži žive bakterije i gljivice i obično se iskazuje kao „zadovoljava” ili „ne zadovoljava”. Kada se čitaju zajedno, rezultati sterilnosti i endotoksina opisuju mikrobiološku kvalitetu znatno bolje nego bilo koji od njih zasebno.
Gdje pronaći rezultate na CoA-u
Na certifikatu potražite dva retka: vrijednost endotoksina u EU/mg i rezultat sterilnosti („zadovoljava” ili „ne zadovoljava”). Manja vrijednost EU/mg znači čišći materijal. Izvješće koje sadrži oba podatka bolje štiti Vaše podatke od onoga koje navodi samo čistoću. Za ostatak dokumenta pogledajte naš vodič za čitanje certifikata analize peptida.
Podaci o endotoksinu u trgovini NordPeps
Certifikati neovisnog vanjskog laboratorija objavljuju se za svaku seriju na našoj stranici s certifikatima čim postanu dostupni. Ako certifikat sadrži rezultate endotoksina ili sterilnosti, pronaći ćete ih ondje, navedene uz seriju na koju se odnose.
Česta pitanja
Testiranje sterilnosti i testiranje endotoksina: po čemu se razlikuju?
Test sterilnosti traži žive bakterije i gljivice. Test endotoksina mjeri bakterijske toksine (lipopolisaharide), koji podnose toplinu i mogu ostati i nakon što bakterije uginu. Sterilan uzorak i dalje može sadržavati endotoksin, pa su potrebna oba testa.
Što je EU/mg?
Jedinice endotoksina po miligramu. To je vrijednost koju daje LAL test i njome se kvantificira kontaminacija endotoksinom. Manji broj znači čišći materijal.
Ako je peptid 99% čist, zašto brinuti o endotoksinu?
HPLC čistoća odnosi se na peptidni udio. Ne otkriva mikrobne kontaminante. Peptid čistoće 99% i dalje može sadržavati endotoksin, a već sam taj endotoksin može iskriviti pokuse na staničnim kulturama i imunološke pokuse.