Tutkimuspeptidien endotoksiini- ja steriiliystarkastukset
Endotoksiini on yleinen ja helposti huomaamatta jäävä syy siihen, että peptidikokeet tuottavat epäluotettavaa dataa, etenkin soluviljelyssä. HPLC voi arvioida peptidin 99-prosenttisesti puhtaaksi, vaikka siinä on silti tarpeeksi endotoksiinia vääristämään tuloksen.
Tämä opas kertoo, mitä endotoksiinit ovat, miksi niillä on merkitystä, miten laboratoriot mittaavat niitä ja miten analyysitodistuksen endotoksiini- ja steriiliysrivejä tulkitaan.
Tällä sivulla
Endotoksiinit lyhyesti
Endotoksiinit ovat lipopolysakkarideja (LPS), suuria molekyylejä, joita on gramnegatiivisten bakteerien ulkokalvossa. Ne vapautuvat, kun bakteerit kuolevat ja hajoavat. Tärkeintä on, että endotoksiinit ovat lämmönkestäviä ja kemiallisesti kestäviä. Bakteerien tappaminen tai suodattaminen pois jättää endotoksiinin jäljelle.
Näin näyte voi olla steriili, eli siinä ei ole mitään elävää, ja silti sisältää endotoksiinia. Kyse on kahdesta eri ongelmasta, ja kumpikin vaatii oman testinsä.
Miksi niillä on merkitystä laboratoriossa
Endotoksiinit aktivoivat voimakkaasti immuunijärjestelmää. Soluviljely- ja immunologiatyössä pienetkin määrät voivat käynnistää sytokiinien vapautumisen, aktivoida signaalireittejä ja siirtää kokeiden mittaustuloksia. Kontaminoitunut peptidi tuo siis mukanaan muuttujan, joka ei liity tutkittavaan yhdisteeseen, eikä kukaan näe sitä ilman testiä. Herkässä työssä endotoksiinin poissulkeminen on yksi tärkeimmistä tarkistuksista, joita voit tehdä.
Endotoksiinin mittaus: LAL-määritys
Vakiomenetelmä on LAL-määritys (Limulus Amebocyte Lysate). Sen reagenssi reagoi, kun endotoksiinia on läsnä. Tulokset ilmoitetaan endotoksiiniyksikköinä milligrammaa kohti (EU/mg). Pienemmät arvot ovat parempia. Eläinperäisistä aineista vapaa, rekombinanttiin C-tekijään perustuva versio yleistyy; se mittaa samaa asiaa.
Steriiliystestaus
Steriiliystestaus on eri tarkistus. Siinä etsitään eläviä bakteereja ja sieniä, ja tulos ilmoitetaan yleensä hyväksyttynä tai hylättynä. Rinnakkain luettuina steriiliys- ja endotoksiinitulokset kuvaavat mikrobiologista laatua paljon paremmin kuin kumpikaan yksinään.
Tulosten löytäminen CoA:sta
Etsi todistuksesta kaksi riviä: endotoksiiniarvo yksikössä EU/mg sekä steriiliyden tulos (hyväksytty tai hylätty). Pienempi EU/mg-arvo tarkoittaa puhtaampaa materiaalia. Raportti, jossa ovat molemmat, suojaa dataasi paremmin kuin sellainen, jossa on pelkkä puhtaus. Asiakirjan muista osista kerrotaan oppaassamme peptidin analyysitodistuksen lukemisesta.
Endotoksiinitiedot NordPepsillä
Riippumattoman kolmannen osapuolen laboratorion todistukset julkaistaan eräkohtaisesti todistussivullamme sitä mukaa kuin ne valmistuvat. Jos todistus sisältää endotoksiini- tai steriiliystuloksia, löydät ne sieltä sen erän yhteydestä, jota ne koskevat.
Yleisiä kysymyksiä
Steriiliystestaus ja endotoksiinitestaus: miten ne eroavat?
Steriiliystesti etsii eläviä bakteereja ja sieniä. Endotoksiinitesti mittaa bakteerien toksiineja (lipopolysakkarideja), jotka kestävät lämpöä ja voivat säilyä bakteerien kuoltua. Steriili näyte voi silti sisältää endotoksiinia, joten molemmat testit tarvitaan.
Mitä EU/mg tarkoittaa?
Endotoksiiniyksikköä milligrammaa kohti. Se on LAL-määrityksen tuottama luku, joka kertoo endotoksiinikontaminaation määrän. Pienempi luku tarkoittaa puhtaampaa materiaalia.
Jos peptidi on 99-prosenttisesti puhdas, miksi välittää endotoksiinista?
HPLC-puhtaus tarkastelee peptidiosuutta. Se ei havaitse mikrobiperäisiä epäpuhtauksia. 99-prosenttisesti puhdas peptidi voi silti sisältää endotoksiinia, ja jo pelkkä endotoksiini voi vääristää soluviljely- ja immunologiakokeita.