Preverjanje endotoksinov in sterilnosti raziskovalnih peptidov
Endotoksin je pogost in zlahka spregledan razlog, da peptidni poskusi dajejo nezanesljive podatke, predvsem v celičnih kulturah. HPLC lahko peptidu pripiše 99 % čistost, čeprav še vedno vsebuje dovolj endotoksina, da popači rezultat.
Ta vodnik pojasnjuje, kaj so endotoksini, zakaj so pomembni, kako jih laboratoriji merijo in kako razumeti vrstici za endotoksin in sterilnost, ki ju boste videli na certifikatu.
Na tej strani
Endotoksini na kratko
Endotoksini so lipopolisaharidi (LPS), velike molekule v zunanji membrani po Gramu negativnih bakterij. Sprostijo se, ko bakterije odmrejo in razpadejo. Ključno je, da so endotoksini toplotno obstojni in kemijsko odporni. Če bakterije uničimo ali jih odfiltriramo, endotoksin ostane.
Tako je lahko vzorec sterilen, brez česar koli živega, in kljub temu vsebuje endotoksin. Gre za dve različni težavi in vsaka potrebuje svoj test.
Zakaj so pomembni v laboratoriju
Endotoksini močno aktivirajo imunski sistem. Pri delu s celičnimi kulturami in v imunologiji lahko že drobne količine sprožijo sproščanje citokinov, vklopijo signalne poti in premaknejo eksperimentalne odčitke. Kontaminiran peptid tako vnese spremenljivko, ki ni povezana s preučevano spojino, in brez testa je nihče ne vidi. Pri občutljivem delu je izključitev endotoksina med najpomembnejšimi preverjanji, ki jih lahko opravite.
Merjenje endotoksina: test LAL
Standardna metoda je test LAL (Limulus Amebocyte Lysate). Njegov reagent reagira, kadar je prisoten endotoksin. Rezultati so podani v endotoksinskih enotah na miligram (EU/mg). Nižje vrednosti so boljše. Vse bolj se uveljavlja različica brez živalskih sestavin, ki temelji na rekombinantnem faktorju C; meri isto.
Testiranje sterilnosti
Testiranje sterilnosti je drugačno preverjanje. Išče žive bakterije in glive in se običajno poroča kot ustreza ali ne ustreza. Če rezultata za sterilnost in endotoksin beremo skupaj, mikrobiološko kakovost opišeta veliko bolje kot vsak zase.
Kje najti rezultate na CoA
Na certifikatu poiščite dve vrstici: vrednost endotoksina v EU/mg in rezultat sterilnosti (ustreza ali ne ustreza). Manjša vrednost EU/mg pomeni čistejši material. Poročilo, ki vsebuje oboje, bolje varuje vaše podatke kot tisto, ki navaja samo čistost. Za preostanek dokumenta si oglejte naš vodnik o branju certifikata analize peptida.
Podatki o endotoksinih pri NordPeps
Certifikati neodvisnega zunanjega laboratorija so objavljeni za vsako serijo na naši strani s certifikati, ko postanejo na voljo. Če certifikat vključuje rezultate za endotoksin ali sterilnost, jih boste našli tam, navedene skupaj s serijo, na katero se nanašajo.
Pogosta vprašanja
Testiranje sterilnosti in testiranje endotoksinov: v čem je razlika?
Test sterilnosti išče žive bakterije in glive. Test endotoksinov meri bakterijske toksine (lipopolisaharide), ki preživijo toploto in lahko ostanejo tudi po odmrtju bakterij. Sterilen vzorec lahko še vedno vsebuje endotoksin, zato sta potrebna oba testa.
Kaj je EU/mg?
Endotoksinske enote na miligram. To je vrednost, ki jo da test LAL, in količinsko opredeljuje kontaminacijo z endotoksini. Nižja številka pomeni čistejši material.
Če je peptid 99 % čist, zakaj skrbeti zaradi endotoksina?
Čistost HPLC zajema peptidni delež. Mikrobioloških kontaminantov ne zazna. Peptid s 99 % čistostjo lahko še vedno vsebuje endotoksin, in že ta endotoksin lahko popači poskuse s celičnimi kulturami in imunološke poskuse.