Puhtaus ja laboratoriotestit
Jos puhtauslukua ei voi tarkistaa, se on pelkkää markkinointia. Tässä on, mitä kukin luvun taustalla oleva testi todella mittaa.
- Mitä 99 %:n HPLC-puhtausluku kertoo?
- Mitä massaspektrometria mittaa?
- Miten HPLC-testaus toimii?
- Mitä laadunvalvonta kattaa?
- Miksi tarvitaan sekä HPLC että massaspektrometria?
- Milloin testaus on aidosti ulkopuolista?
- Miksi erien pitäisi olla tasalaatuisia?
- Miten HPLC-kromatogrammia luetaan?
- Miksi endotoksiini testataan?
- Tarkoittaako ”tutkimuslaatu” mitään?
- Miten voit tarkistaa puhtausväitteen itse?
Mitä 99 %:n HPLC-puhtausluku kertoo?
Se kertoo, että 99 % detektorin havaitsemasta materiaalista tuli erottelussa ulos kohdepiikkinä. Se on piikkien pinta-alojen suhde, ei täydellinen erittely pullon sisällöstä. Se ei huomioi vettä, jäännössuoloja eikä, mikä tärkeintä, sitä, onko piikki oikea molekyyli. Identiteetti vaatii oman testinsä.
Mitä massaspektrometria mittaa?
Se muuttaa näytteen ioneiksi ja mittaa niiden massa-varaussuhteen. Peptidin kohdalla tämä ratkaisee identiteettikysymyksen. Vastaako mitattu massa aiotusta sekvenssistä laskettua massaa? Yksinkertaisesti sanottuna HPLC näyttää, kuinka puhdas näyte on. Massaspektrometria näyttää, mitä näyte oikeasti on.
Miten HPLC-testaus toimii?
HPLC tarkoittaa korkean erotuskyvyn nestekromatografiaa (high-performance liquid chromatography). Näyte pakotetaan paineella tiiviisti pakatun kolonnin läpi. Kukin komponentti etenee omaa tahtiaan sen mukaan, kuinka voimakkaasti se tarttuu kolonnin materiaaliin. Siksi komponentit tulevat ulos eri aikoina. Detektori kirjaa kunkin piikkinä. Piikkien pinta-alojen vertailu antaa puhtausluvun.
Mitä laadunvalvonta kattaa?
Laadunvalvonta tarkoittaa tarkistuksia, jotka erän on läpäistävä ennen julkaisua. Ne kattavat identiteetin, puhtauden ja ulkonäön sekä tarvittaessa steriiliyden ja endotoksiinin. Tärkeintä on kirjanpito. Jokainen tulos kirjataan eränumeroa vasten. Näin mikä tahansa yksittäinen pullo voidaan jäljittää täsmälleen niihin tietoihin, joiden perusteella se julkaistiin.
Miksi tarvitaan sekä HPLC että massaspektrometria?
Kumpikin vastaa eri kysymykseen, eikä kumpikaan voi korvata toista. HPLC erottelee seoksen ja ilmoittaa, kuinka suuri osa siitä on pääkomponenttia. Se on puhtaus. Massaspektrometria punnitsee molekyylin ja vahvistaa, että se on aiottu yhdiste. Se on identiteetti. Näyte voi olla 99-prosenttisesti yhtä ainetta ja silti väärää ainetta.
Milloin testaus on aidosti ulkopuolista?
Kun laboratorio, jolla ei ole intressiä lopputulokseen, tekee testin ja antaa raportin itse. Analyysitodistus, jossa on riippumattoman laboratorion oma nimi ja viitenumero, kelpaa. Toimittajan oma sisäinen tulos, kirjoitettu uudelleen brändättyyn pohjaan, ei kelpaa. Tämä pätee riippumatta siitä, kuinka viralliselta pohja näyttää.
Miksi erien pitäisi olla tasalaatuisia?
Tulos, jota kukaan ei pysty toistamaan, ei ole kovin paljon arvoinen. Jos materiaali muuttuu erästä toiseen, mikä tahansa havaitsemasi ero voi johtua erästä eikä muuttujasta, jota aioit testata. Eräkohtainen dokumentaatio tekee ”samasta erästä” kirjatun tosiasian arvauksen sijaan.
Miten HPLC-kromatogrammia luetaan?
Retentioaika on x-akselilla. Detektorin vaste on y-akselilla. Korkea piikki on yhdisteesi, ja sen retentioajan pitäisi vastata vertailunäytettä. Katso sitten kolmea asiaa. Onko piikkien välinen perusviiva puhdas? Onko pääpiikin lähellä pieniä piikkejä? Onko pääpiikki symmetrinen? Olkapää tai laahaava häntä viittaa epäpuhtauteen, joka tulee kolonnista ulos samaan aikaan.
Miksi endotoksiini testataan?
Endotoksiinit ovat bakteerin soluseinän osia. Ne säilyvät steriloinnissa ja voivat vääristää biologisia määrityksiä. Tavallinen testi on LAL-määritys, ja tulokset ilmoitetaan endotoksiiniyksiköinä. Endotoksiini on eri kysymys kuin steriiliys. Näytteessä ei välttämättä ole lainkaan eläviä organismeja, ja silti siinä voi olla aiemmin tapettujen bakteerien jättämää endotoksiinia.
Tarkoittaako ”tutkimuslaatu” mitään?
Ihannetapauksessa se tarkoittaa, että materiaalin taustalla on dokumentaatio. Identiteetti on vahvistettu, puhtaus mitattu, tulokset on sidottu yhteen erään ja tuote myydään vain laboratoriokäyttöön. Mikään viranomainen ei kuitenkaan määrittele termiä, joten sellaisenaan se ei lupaa mitään. Asiakirjat antavat sille merkityksen. Etiketti ei.
Miten voit tarkistaa puhtausväitteen itse?
Aloita vertaamalla paperia pulloon. Etiketin eränumeron on löydyttävä analyysitodistuksesta. Varmista seuraavaksi, että analyysitodistuksessa nimetään riippumaton laboratorio. Siinä pitäisi olla HPLC-puhtausluku ja identiteettitulos, joko massaspektrometriasta tai vertailustandardia vasten tehdystä HPLC:stä. Siinä pitäisi myös olla testipäivämäärä. Jos jokin näistä puuttuu, pidä lukua varmentamattomana.